Sábado, 18 de Noviembre de 2017

Dinámica y función del genoma

     Replicación del DNA del bateriófago ø29

 

 

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Margarita Salas 

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Resumen de Investigación:

Hemos continuado con el estudio de la replicación del DNA de ø29 que se inicia mediante la proteína terminal (TP). Hemos optimizado los orígenes de replicación del DNA de ø29 para la replicación iniciada con TP. La Lys529 de la DNA polimerasa de ø29 está implicada en la estabilización del extremo del "primer" en el sitio activo de polimerización. Dicha lisina y el Glu233 de la TP establecen contactos para la iniciación de la replicación del TP-DNA. El motivo LExE, conservado en DNA polimerasas de tipo eucariótico, está implicado en la interacción con el nucleótido entrante. Los residuos Tyr226 y Try390 en el sitio activo de la DNA polimerasa de ø29 están implicados en el mecanismo de translocación y en la unión del dNTP y del pirofosfato. En la TP de ø29, existe una correlación entre la capacidad de unión al DNA y la localización en el nucleoide. Por otra parte, la localización nuclear y en el nucleoide de las TPs de ø29 y otros bacteriófagos son funciones conservadas independientemente. La proteína p1 de ø29 se asocia con el anillo FtsZ del divisoma de Bacillus subtilis produciendo un aumento en la longitud celular lo que da lugar a una mayor acumulación del DNA viral. En colaboración con la Dra. Beatriz González hemos obtenido la estructura tridimensional de la uracil-DNA glicosilasa (UDG) de B. subtilis sola y en complejo con la proteína p56 de ø29 y hemos determinado aminoácidos críticos para la inhibición de la UDG por p56.

 Fig1 300  

Estructura tridimensional del complejo UDG-p56

 

   
Fig2 300  
Colocalización de la proteína p1 de ø29 y la FtsZ de B. subtilis

 

 

 

 

 

 

 

 


 

Publicaciones relevantes:

  • M. de Vega, J.M. Lázaro, M. Mencía, L. Blanco and M. Salas. (2010). Improvement of ø29 DNA polymerase amplification performance by fusion of DNA binding motifs. Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 107, 16506-16511.
  • D. Muñóz-Espín, I. Holguera, D. Ballesteros-Plaza, R. Carballido-López and M. Salas (2010). Viral terminal protein directs early organization of phage DNA replication at the bacterial nucleoid. Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 107, 16548-16553.
  • M. Mencía, P. Gella, A. Camacho, M. de Vega and M. Salas (2011). Terminal protein-primed amplification of heterologous DNA with a minimal replication system based on phage ø29. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 108, 18655-18660.
  • M. Redrejo-Rodríguez, D. Muñoz-Espín, I. Holguera, M. Mencía and M. Salas (2012). Functional eukaryotic nuclear localization signals are widespread in terminal proteins of bacteriophages. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 109, 18482-18487.
  • I.Holguera, D. Muñoz-Espín and M. Salas (2015). Dissecting the role of DNA-binding residues of the ø29 terminal protein in viral DNA replication. Nucleic. Acids Res. 43, 2790-2801

 

Tesis doctorales:

David Ballesteros Plaza (2014) Estudio funcional de las proteínas p1 y p17 del bacteriófago ø29. Universidad Autónoma de Madrid. Directores: Margarita Salas Falgueras y Daniel Muñoz Espín.

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La Fundación General CSIC, financia a través del Programa ComFuturo el contrato del investigador Modesto Redrejo Rodríguez para la realización del proyecto "Nuevas ADN polimerasas de fusión con aplicaciones biotecnológicas".


 

Currículum Vitae Margarita Salas

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